Люминесцентные микроскопы

Некоторые вещества под воздействием энергии возбуждения способны излучать свечение — это называется явлением люминесценции. Для исследования объектов, обладающих данным свойством, используют люминесцентные микроскопы — они находят применение в таких областях наук, как биология, цитология, генетика, иммунология (иммунохимические, иммунологические, иммуноморфологические и иммуногенетические анализы) и многих других для исследования различных люминесцирующих материалов. Являются незаменимыми при диагностике различных инфекций антигенного состава, например, вирусных и бактериальных.

Среди преимуществ люминесцентных микроскопов стоит отметить:

• возможность наблюдения как прозрачных, так и непрозрачных веществ, а также поверхностей темных объектов;
• получение контрастного изображения исследуемого объекта на темном фоне. 

Принцип действия люминесцентных микроскопов заключается в получении изображения посредством светового потока свечения самого объекта исследования. Свет, прошедший сквозь возбуждающий светофильтр в устройстве микроскопа, вызывает свечение объекта, данный световой поток затем проходит через запирающий светофильтр, где отсекается возбуждающее излучение, и остается только люминесцентный, то есть световой поток свечения объекта.

Устройство флуоресцентных микроскопов «Альтами» подобно конструкции металлографических (работающих по методу светлого поля в отраженном свете*), но есть несколько функциональных различий:

• источником света здесь выступает ртутная лампа вместо галогенной;
• имеются блоки с уже упоминаемыми светофильтрами и дихроичным зеркалом.

Дихроичное (полупрозрачное) зеркало в осветительной системе микроскопа в данном случае нужно для того, чтобы отражать световой поток от источника света, направляя его в объектив, который освещает объект, и пропускать свет, затем отраженный от объекта и вновь прошедший через объектив.

Существует несколько способов крепления люминесцентных блоков:

• 3-х позиционное устройство с горизонтальным перемещением (Альтами ЛЮМ 2);
• револьверное устройство для 5 блоков, из которых 1 пустой (Альтами ЛЮМ 1).

Что касается объективов, то люминесцентные (PL FL) ставятся в комплекте с обычными (PL) объективами проходящего и отраженного света. Чаще всего используют объектив с 10 или с 40-кратным увеличением, так как для 100X требуется иммерсионное масло, которое достаточно быстро используется. Для нацеливания на объект интереса используется объектив 4X.

Для работы с цифровыми люминесцентными микроскопами (например, Альтами ЛЮМ 1 и Альтами ЛЮМ 2) лучше приобретать цифровой фотоаппарат, нежели видеокамеру (типа Altami FireWire 1340R7 1/2CCD). Это объясняется тем, что съемка слабо светящихся объектов возможна лишь при использовании камеры с высокой чувствительностью. Такое оборудование стоит дороже фотоаппарата в 1,5-2 раза. Так как настройки последнего позволяют задавать значения выдержки, экспозиции и др., а разрешение фотоаппарата больше, то использование камеры оправдано только в случае необходимости получения видео. Для управления настройками устройства захвата, а также для анализа и обработки полученных изображений совместно с цифровыми флуоресцентными микроскопами компании «Альтами» используется программное обеспечение Altami Studio.

*См. статью Металлографические исследования по методам светлого и темного поля в отраженном свете